Digestión de DNA con enzimas de restricción
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- Опубліковано 10 лют 2025
- El proceso de clonación de genes o en la transferencia de un gen a otro vector inicia con la digestión del DNA con enzimas de restricción.
En este video mostramos como realizamos la digestión de dos genes y un plásmido con las enzimas de restricción HindIII y NotI. Además, realizamos el análisis de digestión mediante una electroforesis en gel de agarosa.
Muchas gracias por tu explicación y conocimientos con todo el respeto esta muy guapo saludos
Excelente video muy práctico 🥹
Gracias, estoy ahora mismo cursando maestría en Biología Molecular en Venezuela. Gracias por compartir tus videos
Holaa, todavía me falta un año para culminar el grado, pero también estoy en Venezuela y me interesa, podrías contarme sobre tu experiencia haciendo la maestría?
Muy buena práctica colega, te felicito.
Que alguien le diga a Luis que me atrajo más que el F a un electrón💖
Hola, que cantidad de plasmido vector agregaste y de los plasmidos de propagación agregaste 2.5 microlitros de cada uno o 5 microlitros de cada uno?
Súper bien explicado, muchas felicidades. Tengo una pregunta bien básica pero no he encontrado respuesta concreta. ¿Cómo eliges el marcador?, es decir, ¿cómo eliges qué marcador usar?
Hola. El marcador a usar se determina por el peso del gen que quieres amplificar, digerir o ligar. Normalmente los marcadores comerciales como de las empresas Thermo o Invitrogen presentan un rango de pares bases desde los 200 a 10 mil pares de bases. Para esto, es necesario conocer previamente el tamaño em pares de bases de la secuencia que trabajas.
muy interesante Luis Valverde, felicitaciones!!
Excelente!.. Gracias muchachos por compartir me ayudo mucho
Hola. Por favor podrias hacer un video explicando como se haría el análisis de los datos de una qpcr. Me vendría genial. Un beso desde España
Hola Cristina, ese análisis es para que tipo de datos de qPCR, expresión de genes ?
@@piscoscience
Si para ver la expresión de los genes. Por favor. Un beso
@@cristinalendinez2846 me puedes passar tu mail para enviarte un material sobre el tema? saludos
@@piscoscience
Claro que si muchisimas gracias
cristilendinez@gmail.com
@@piscoscience Diego me lo puedes mandar también clamirja@yahoo.es
Como recomendación, es mejor alicuotar la master mix y a ella agregar los 5 ul de adn, así aseguras que cada tubo lleve el mismo volumen y ademas puedas "enjuagar" la puntilla del adn.
Duda, la digestión se hizo con ambas enzimas al mismo tiempo?
Hola @Marycruz, gracias por la recomendación. Realizar el mix es sumamente importante para garantizar la misma cantidad en los tubos. Para esa digestión sí usamos las dos enzimas al mismo tiempo, usamos por eso el fats buffet y calculamos las proporciones de ambas enzimas con el double digest.
Hola dan asesorias?
Muy bueno !!! éxitooos
Buenas Noches.
1. Tienen el tutorial del paso a paso para buscar, encontrar y extraer los genes de los cuales hablan en el minuto 2:10 ?
2. Tienen alguna practica de biología molecular para observar el cariotipo de una planta?
3. Como es el protocolo para extraer y transferir un plasmido?
4. Y POR ULTIMO PERO NO MENOS IMPROTANTE, DIGANME QUE SABEN COMO HACER LOS SIGUIENTES PROCEDIMIENTOS DE EPIGENÉTICA:
* ACETILACIÓN
* METILACIÓN
* HIDROXILACIÓN
Gracias por su atención.
Espero su colaboración.
Una pregunta, cual es la temperatura de activación e inactivación de las enzimas de restricción?
Hola, disculpa por respondr ahora =(. La temperatura de activación es de 37 C (comunmente). Para inactivarlas tendrías que elevar la temperatura por encima de 80 C. Un abrazo
AYUDA!!!!😱😱😱
Del DNA una vez que es cortado y se usan las enzimas de restriccion y se inserta el gen de interes (plasmidico) no se sabe si fue insertado a la izquierda o derecha
Como puedo saber en que sentido se insrto ese Gen (a la derecha o a la izquierda)
Y cuantos pares de bases tiene?
Ayuda por fa 😭😭
Hola Iván. Cuando hacemos el corte con las enzimas usamos dos enzimas diferentes, en este caso no tenemos como insertar el gen "al revés", por así decirlo. Cuando usas las enzimas con corte diferente ya garantízas que el gen que se inserta esté en fase correcta a ser leído (si es que no tuviste algún error con la construcción de primeros). En el caso que uses por ejemplo el vector pGEM-T antes de hacer la inserción en el vector final, puedes correr el riesgo de insertar el gen "al revés" pues usas EcoRI para hacer la digestión. En esos casos es necesario hacer un secuenciamiento del gen para verificar que todo esté correcto.
Para saber cuantos pares de bases es simple, si ya tienes la secuencia del gen, puedes colocarlo en el Word y te dirá cuantas letras hay (que sería el número de bases). Si estas cortando un plasmido con las enzimas y no tienes la menor idea de donde cortará, tienes que usar un marcador de peso molecular que contiene fragmentos de DNA con tamaño conocido, de esa forma puedes estimar el tamaño en pares de bases de los fragmentos generados después de la digestión
@@piscoscience amigo en verdad muchas gracias por la información explcas muy bien tus videos y todo,ya pude tender mejor gracias a ti
Ya tienes un suscriptor mas 😊👏✌
Saludos!
hola,estudiaste licencuatura en biología y luego master en biologia molecular?
he visto que la mayor parte estudian otra carrera pero teeminan haciendo master en biologia molecular,y sabes cual seria la diferencia si estudiase biotecnologia e hiciera master en biologia molecular?
Hola! Hice biología general y luego hice máster en física biomolecular. Ahora estoy terminando mi doctorado en la misma área. Te digo que en el laboratorio donde trabajo hay biológos, físicos, químicos, farmacéuticos, matemáticos, estadísticos, etc. Todos haciendo la misma especialidad pero con temas de investigación diferentes. Tu formación te ayudará a entender ciencia básica, tu formación de postgrado te permitirá especializarte en una línea de investigación.
Si estudiaste biotecnología y haces un máster en biología molecular no tendrás problemas para entender las materias que llevarás. Si bien el título que tendrás es de máster en biología molecular, tu tema de tesis puede estar ligado a la biotecnología.
el plásmido lineal es donde se va a ligar el gen en el próximo video?
Hola Nicole. Sí sería en el próximo video. Disculpa porque aún no he podido subir el video sobre la parte de ligación de genes pero puedes ver el video que es la continuación de la misma: PCR de colonias para confirmar que el gen ligó en el plásmido.
@@piscoscience Gracias!
genial
El DNA de que es ?
Hola, uno es un plasmido para e. coli y el otro es un fragmento de un gen humano
Necesito el instagram de Luis es para un deber jaja
Jajaja creo que lo encuentras en fb