O sequenciamento Sanger possui algumas limitações, uma delas, é a incapacidade de detectar grandes deleções, e portanto, é necessário a utilização de técnicas complementares (como o MLPA) para auxiliar na detecção de tais alterações.
Essas deleções seriam alterações que levam antes da síntese do segmento exon de DNA ? , Pq algumas doenças como hemofilia, o diagnóstico por meio do PCR, não consegue detectar algumas deleções ou alterações do sítio de clivagem do segmento intron. Muitas vezes sabemos que esse tipo de segmento está associado a 1.5 % de doenças genéticas. Isso explica o fato do câncer ou outras doenças de caráter gênico serem muitos difíceis de ter uma possível cura em si ?
Que aula perfeita! Essas aulas estão tirando muitas dúvidas que eu tinha. Faço sequenciamento há 2 anos e existiam (ainda existem) algumas lacunas que estão sendo preenchidas com essas aulas. Deveriam existir mais pessoas assim como você em diferentes áreas do conhecimento. Está de parabéns! 👏🏻
Parabéns pela aula. Muito boa! Sou da área de química e trabalho com eletroforese capilar, não há dúvidas de que o tema foi muito bem explicado aqui. Abs,
A sequência do primer deve ser complementar parte do DNA ao qual ele vai se ligar. Como você sabe a sequência do primer que deve ser usada se você não conhece a sequência do DNA a ser sequenciado? E como você me garante que o primer vai ser adicionado na extremidade da fita e não no meio dela?
Eduardo, ótima aula de Sanger Sempre usei o Sanger para sequenciar genes mitocondriais, aí é fácil fazer o contig tem 2 fitas diferentes e são complementares. Mas gostaria de uma dica para Genes Nucleares, como funciona? Pretendo estudar SNP de gene nuclear, então em alguns casos eu posso ter 4 filamentos simples diferentes, no caso de um heterozigoto correto, então na posição onde houver mutação, quando estou sequenciando um dos primers posso ter 2 picos na mesma posição, por exemplo, um C e um T concomitantemente. Na hora de formar o contig o software consegue identificar isto? obrigado e parabéns mais uma vez
Olá! Como operacionalmente, ou seja, na prática, juntamos as duas leituras feitas no sequenciamento (correspondentes aos primers forward e reverse separadamente) em uma só??? Primeiramente como inverter a leitura do primers reverso (fazer o reverso complementar), e em seguida como alinhar as duas leituras (direta e reversa previamente invertida), editando um trecho único, que é o que será usado nas análises, buscas no Genbank, etc. ????
Não se utiliza dois tipos de primers no sequenciamento Sanger. Se isso fosse feito, para fragmentos de DNA de mesmo tamanho teríamos fluorescências de diferentes cores.
Como se certificar que em todos os nucleotídeos da sequência alvo se inseriu um ddntp para que ele seja identificado nos picos de fluorescência? Por mais que os fragmentos venham de cópias da PCR não é possível que algum passe batido e ao invés de se incorporar um ddntp incorpore um dntp e essa parte da sequência não seja contabilizada no sequenciamento ? Obggg!!
Neste tipo de abordagem, os fragmentos desconhecidos são clonados antes do sequenciamento. E os primers são desenhados nas sequências do clone (que são conhecidas) que flanqueiam o fragmento desconhecido.
Uma duvida... e o primer? como defino a sequencia dele? para o pCR eu amplifico o que eu estou procurando, vou ao geneBank e consigo escolher a sequencia, etc...mas da tecnica de Sanger nao entendi...
Eduardo, O tamanho dos picos do cromatograma referente às bases tem a ver com a qualidade da leitura pelo software? Fiquei com essa dúvida. Muito obrigado.
Simplesmente por praticidade e custo. Veja como várias aplicações, antes realizadas por diferentes técnicas, hoje estão migrando para NGS. NGS está ficando cada vez mais fácil de fazer e cada vez mais barato.
Ótima aula!! tenho só uma duvida. Se por acaso eu apenas não colocar o Dideoxinucleotideo de timina mas colocar de todo o restante (G,A,C) na hora de gerar o gráfico com fluorescência a maquina irá ignorar esse espaço sem timina e continuará lendo o restante da sequencia? No gel que correu terá as marcações de timina "normais" correto?
Oque faz com que a DNA polimerase use um nucleotídeo modificado e interrompa o processo de adição de novos nucleotídeos ? como ela decide a hora de escolher o nucleotídeo modificado e o não modificado ?
Acaso, só que como são muitas moléculas, uma hora ela trava e fica tal fragmento, outra hora ela ignora e trava mais na frente, formando outro fragmento. Então a eletroforese separa todos esses fragmentos
![Método SANGER Sequenciamento do DNA [Vídeo-Aula Biologia Molecular] BIOMEDICINA](/img/n.gif)
Nossa, que aula perfeita!! Muito obrigado!!
O pai da BioMol na atualidade, que aula incrível
O sequenciamento Sanger possui algumas limitações, uma delas, é a incapacidade de detectar grandes deleções, e portanto, é necessário a utilização de técnicas complementares (como o MLPA) para auxiliar na detecção de tais alterações.
Essas deleções seriam alterações que levam antes da síntese do segmento exon de DNA ? , Pq algumas doenças como hemofilia, o diagnóstico por meio do PCR, não consegue detectar algumas deleções ou alterações do sítio de clivagem do segmento intron. Muitas vezes sabemos que esse tipo de segmento está associado a 1.5 % de doenças genéticas. Isso explica o fato do câncer ou outras doenças de caráter gênico serem muitos difíceis de ter uma possível cura em si ?
Super simples de entender com essa explicação, obrigado
Que aula perfeita! Essas aulas estão tirando muitas dúvidas que eu tinha. Faço sequenciamento há 2 anos e existiam (ainda existem) algumas lacunas que estão sendo preenchidas com essas aulas. Deveriam existir mais pessoas assim como você em diferentes áreas do conhecimento. Está de parabéns! 👏🏻
Um espetáculo a sua aula. Parabéns, você resume sem omitir informações importantes. Obrigada por difundir conhecimentos.
Aulas incríveis! Parabéns! Excelente didática com muito objetivo e imagens que agregam muito ao ensino, estou maratonando
Parabéns pela aula.
Muito boa!
Sou da área de química e trabalho com eletroforese capilar, não há dúvidas de que o tema foi muito bem explicado aqui.
Abs,
Valeu!! muito obrigado!
Que aula incrível, super simples e bem explicada...aprendi muito em 30 minutos muito mais que em 1 hora de aula...Amei!!!!
Muito bom poder revisar este conteúdo.
Parabéns! Aula genial!
muito muito muito muito bom, obrigadaaaaa
Excelente explicação.
Completão, parabéns!
Melhor aula de sequenciamento de Sanger, pqp! mto bom! parabéns!
Muito boa a aula, simples explicação e bem didática.
Parabéns pela aula! Como sugestão, por favor, faça uma aula sobre CRISPR? Obrigada
Com certeza! 😉
Eu também queria uma aula dessa também
obrigada!!!! finalmente entendi
Eduardo como sempre com uma didática incrível, parabéns!!
Muito boa!
Usando o vídeo para estudar pra seleção de doutorado!!! Muito obrigada, excelente aula!
Muito legal! Adorei
Parabéns pela clareza, muito boa a aula. Obrigada!
Que canal fantástico. Obrigada!
Sem palavras, aula maravilhosa.
uau, que aula perfeita, juro! a didática, os desenhos, obrigada por esclarecer minhas dúvidas!!!!
Parabéns pela aula e muito obrigada!!!!
Parabéns pela aula professor, está me trazendo um encanto sobre biomol. SUCESSO!
Muita boa aula 🙏🏻
Adorei aula! Muito obrigada
Excelente aula. Parabéns pela didática!
Que aula maravilhosa! obrigada por me ajudar.
Que aula maravilhosaaa! Parabéns, professor!
Que didática!!!! Obrigada!
Aula perfeita
Aula perfeita. Parabéns, sucesso!
que aula INCRÍVEL 👏🏻
Aula sensacional!!
parabens pela aula
Que aula perfeita 💜
Muito boa a aula!
Aula perfeita mesmo! Professor teria como você fazer uma aula de Analise de Metilação do Dna?
Sugestão anotada! : )
Ótima aula❤
Aula fantástica!!!!!!
Vídeo perfeito! Muito obrigada. Melhor vídeo sobre o tema, que vi. Muito bem explicado.
Parabéns pelo riquíssimo conteúdo
Muito obrigada pelo vídeo! Me ajudou muito!!!!!
Perfeito!!!!!!!!!!
Excelente!
excelentee!!
Aula bem explicada
Aula topppppppppp! totalmete detalhada. Obrigadooooooo!
Parabéns 😃🥳🥳 excelente aula.
Nossa Professor, muito bom! Obrigado!
Muito bom como sempre brother, parabéns
Parabéns pela aula! Muito esclarecedora
Ótima aula! Muito obrigado!
Ótima aula!
A sequência do primer deve ser complementar parte do DNA ao qual ele vai se ligar. Como você sabe a sequência do primer que deve ser usada se você não conhece a sequência do DNA a ser sequenciado? E como você me garante que o primer vai ser adicionado na extremidade da fita e não no meio dela?
muito bom !!
Se eu não sei a sequência da fita como desenhar o primer?
Aula perfeita. Muito obrigada msm!
Obrigado Thalyta.
Parabéns pela clareza e didática nas aulas, sempre muito excelente! Gostaria de saber se você tem alguma aula sobre Single Cell? Desde já agradeço.
Toppp. Obrigada
Eduardo, ótima aula de Sanger
Sempre usei o Sanger para sequenciar genes mitocondriais, aí é fácil fazer o contig tem 2 fitas diferentes e são complementares. Mas gostaria de uma dica para Genes Nucleares, como funciona? Pretendo estudar SNP de gene nuclear, então em alguns casos eu posso ter 4 filamentos simples diferentes, no caso de um heterozigoto correto, então na posição onde houver mutação, quando estou sequenciando um dos primers posso ter 2 picos na mesma posição, por exemplo, um C e um T concomitantemente. Na hora de formar o contig o software consegue identificar isto?
obrigado e parabéns mais uma vez
Olá! Como operacionalmente, ou seja, na prática, juntamos as duas leituras feitas no sequenciamento (correspondentes aos primers forward e reverse separadamente) em uma só???
Primeiramente como inverter a leitura do primers reverso (fazer o reverso complementar), e em seguida como alinhar as duas leituras (direta e reversa previamente invertida), editando um trecho único, que é o que será usado nas análises, buscas no Genbank, etc.
????
Não se utiliza dois tipos de primers no sequenciamento Sanger. Se isso fosse feito, para fragmentos de DNA de mesmo tamanho teríamos fluorescências de diferentes cores.
Como se certificar que em todos os nucleotídeos da sequência alvo se inseriu um ddntp para que ele seja identificado nos picos de fluorescência? Por mais que os fragmentos venham de cópias da PCR não é possível que algum passe batido e ao invés de se incorporar um ddntp incorpore um dntp e essa parte da sequência não seja contabilizada no sequenciamento ? Obggg!!
Como voce sintetiza o primer caso va fazer um sequenciamente de novo, considerando que voce nao sabe a sequencia?
Neste tipo de abordagem, os fragmentos desconhecidos são clonados antes do sequenciamento. E os primers são desenhados nas sequências do clone (que são conhecidas) que flanqueiam o fragmento desconhecido.
Cacete, que canal foda!
prof tem vídeos sobre marcadores genéticos aqui? Não achei
Uma duvida... e o primer? como defino a sequencia dele? para o pCR eu amplifico o que eu estou procurando, vou ao geneBank e consigo escolher a sequencia, etc...mas da tecnica de Sanger nao entendi...
Aula incrível!
Sim amiga kkkkkkk
Muito boa mesmo
Qual programa vc usa para fazer as aulas?
Então, a importância dos ddNTPs seria gerar fragmentos de varios tamanhos?
Perfeito. Isso mesmo.
Eu tenho essa dúvida, pq precisamos de outras técnicas se já tem a técnica que sequência o DNA???
Eduardo,
O tamanho dos picos do cromatograma referente às bases tem a ver com a qualidade da leitura pelo software? Fiquei com essa dúvida.
Muito obrigado.
Não respondeu a pergunta que vc fez no final do vídeo. Pq fazer outras técnicas como pcr, se existe o sequenciamento?
Simplesmente por praticidade e custo. Veja como várias aplicações, antes realizadas por diferentes técnicas, hoje estão migrando para NGS.
NGS está ficando cada vez mais fácil de fazer e cada vez mais barato.
Muito boa a aula, tem como voce disponibilizar os slides ?
Ótima aula!! tenho só uma duvida. Se por acaso eu apenas não colocar o Dideoxinucleotideo de timina mas colocar de todo o restante (G,A,C) na hora de gerar o gráfico com fluorescência a maquina irá ignorar esse espaço sem timina e continuará lendo o restante da sequencia? No gel que correu terá as marcações de timina "normais" correto?
Oque faz com que a DNA polimerase use um nucleotídeo modificado e interrompa o processo de adição de novos nucleotídeos ? como ela decide a hora de escolher o nucleotídeo modificado e o não modificado ?
Acaso.
Acaso, só que como são muitas moléculas, uma hora ela trava e fica tal fragmento, outra hora ela ignora e trava mais na frente, formando outro fragmento. Então a eletroforese separa todos esses fragmentos
É necessário fazer a técnica de PCR seguida da técnica de sequenciamento de Sanger ou só o sequenciamento de Sanger é suficiente?
O sequenciamento geralmente é feito após PCR. O sequenciamento seria o final da técnica, não precisa fazer mais nada depois.
escrevi e apaguei tantas vezes que desisti kkkkkk fui tapeada
Pqp. Entrei nesse vídeo só pra saber qual era o tamanho da onda e a pessoa me diz que "não importa"...( Em 19:10)
Muito obrigada pela aula impecável, sor!