Bioquímica clínica - Princípio e reagentes utilizados para a dosagem da glicose

Princípio do teste A determinação da glicose por métodos enzimáticos apresenta elevada especificidade e simplicidade operacional envolvida. A glicose oxidase (GOx) é uma enzima que se liga a beta-D-glicose (um isómero do seis carbonos da glicose) e auxilia na quebra desta açúcar nos seus metabolitos. Ela é uma proteína dimérica que catalisa a oxidação da beta-D-glicose em D-glucono-delta-1,5-lactona, que depois é hidrolisada em ácido glucônico. De maneira a poder funcionar como catalisador, a GOx requer um cofactor (dinucleótido de flavina-adenina - FAD). A FAD é um componente comum nas reações biológicas de oxidação-redução. Estas reações envolvem um ganho ou perda de eléctrons de uma molécula. A FAD pode funcionar como aceitadora inicial de eléctrons, sendo reduzida a FADH2. Depois o FADH2 é oxidado pelo aceitador final de eléctrons, o oxigênio molecular (O2). O O2 é então reduzido a peróxido de hidrogênio (H2O2). O H2O2 é a principal espécie reativa de oxigênio. Existe uma variedade de enzimas oxidativas que irão decompor estas espécies reativas de oxigênio. As peroxidases são um grupo de enzimas oxiredutases que oxidam substratos orgânicos, tendo o peróxido de hidrogênio como molécula aceitadora de elétrons. A reação é denominada peroxidação, sendo descrita pela equação: Xreduzida + H2O2 (peroxidase + cofator) ---- Xoxidada + H2O Nesta equação, X é a molécula que sofre peroxidação (substrato). A glicose oxidase catalisa a oxidação da glicose de acordo com a seguinte reação: Glicose + O 2 + H 2 O ------------- Ácido Glucônico + 2H2O2 2H2O2 + 4-Aminoantipirina + fenol -------------- Antipirilquinonimina + 4 H2O2 A enzima glicose oxidase catalisa a reação quebrando a glicose em dois compostos: ácido glucônico e peróxido de hidrogênio. O peróxido de hidrogênio formado reage com o cromógeno (4-aminoantipirina e fenol), sob ação catalisadora da peroxidase, através de uma reação oxidativa de acoplamento formando uma antipirilquinonimina vermelha cuja intensidade de cor é proporcional à concentração da glicose na amostra. O complexo corado vermelho (quinonimina) apresenta absorbância proporcional à concentração de glicose na amostra analisada, medida a 505 nm (filtro verde 500-520 nm). Reagentes do Kit Glicose Liquiform (Labtest): Reagente 1: Armazenar entre 2 - 8ºC. Contém tampão fosfato, pH 7,5; fenol; glicose oxidase, peroxidase, 4-aminoantipirina , azida sódica e surfactantes. Padrão calibrador: Armazenar entre 2 - 30ºC. Contém: glicose 100 mg/dL e biocida não tóxico. Após o manuseio sugere-se armazenar bem vedado para evitar evaporação. Referências 1. Glicose Liquiform: Instruções de uso, Labtest Diagnóstica, REF_133, 2011. Disponível em: labtest.com.br... 2. Trinder, Annalcs Clin Biochem, 6:24, 1969 3. WIKIPÉDIA: a enciclopédia livre. Wikimedia, 2019. Disponível em: pt.wikipedia.o... 4. WIKIPÉDIA: a enciclopédia livre. Wikimedia, 2019. Disponível em: pt.wikipedia.o...