El indicador o marker lo que te da es una referencia de bandas con tamaños de moléculas conocidas. Si tu banda se encuentra entre dos bandas del indicador te dice que tu molécula de ADN tiene un tamaño intermedio entre esas dos bandas del indicador cuyo tamaño conoces. Si ya sabés el tamaño de tu molécula de interés, eso te va a permitir una identificación (al menos estimada)
Gran video y excelente explicación! Solo tengo una duda, si experimentalmente coloco una muestra de ADN y ARN juntos en una electroforesis, qué puede pasar con el ARN? Se puede diferenciar del ADN en el gel? Saludos y gracias por el video!!
Hola! Muchas gracias! 😊 La técnica como la expliqué en el video sirve específicamente para estudiar moléculas de ADN, ya que el bromuro de etidio que se usa para visualizar las bandas en el gel se une a ácidos nucleicos de doble cadena (ADN, y no ARN). Para estudiar el ARN hay dos formas. Una directa y otra indirecta. La directa sería tomando el ARN directamente de una muestra, correrlo por electroforesis en un gel y luego transferirlo a una membrana de nitrocelulosa por ejemplo, que se trata con una sonda de ADN marcado que se va a aparear específicamente con el fragmento de ARN que se quiera estudiar, para poder visualizarlo. Esta técnica se llama Northern blot (similar a lo que se hace en el Western blot con las proteínas que explico en otro video de esta serie). La otra forma indirecta es tomar el ARN de la muestra y hacer una RT-PCR (PCR con transcripción reversa, que explico en otros videos de esta serie), para pasar del ARN a ADNc y amplificarlo. De esa manera sí se podría visualizar de la manera que vemos en este video simplemente con la electroforesis sin hacer un bloting posterior. La elección del método dependerá de las posibilidades del lab y de lo que se desee estudiar. Espero haber sido clara! 😉
Luego de identificar y separar los fragmentos de interés, ¿Cómo se pueden observar?. Es decir, si quiero ver la secuencia al detalle, que tecnicas o equipos se usan?
Lo que podés observar con el método explicado en este video es únicamente las bandas que te informan la presencia o ausencia de un fragmento en cuestión. Si lo que querés conocer es la secuencia en detalle de ese fragmento tenés que hacer posteriormente una secuenciación. En esta misma serie del canal encontrás un vídeo sobre secuenciación explicando la técnica 😉 ua-cam.com/video/l56oBvwbzv0/v-deo.htmlsi=0NX4Lk3nMJfXNIXu
Perdona q te moleste, tengo una pregunta… la única diferencia entre gel de agarosa y poliacrilamida esta en el tamaño de poro q se consigue? Permitiendo distinta movilidad de distintos tamaños? Y por otra parte, cuáles serían las limitaciones de la electroforesis en gel en el ámbito forense? Si te va bien contestarme te lo agradezco, si no no te preocupes ☺️ no pasa nada. Muchas gracias!
Hola!! Si, básicamente con un gel de poliacrilamida podés lograr una resolución mucho mayor que con la agarosa si necesitas ver diferencias de pocas bases, pero es más engorroso y caro de hacer. Vemos un poco del gel de poliacrilamida en el vídeo de Western blot. Respecto a las limitaciones de estás técnicas electroforéticas en el ámbito forense... No sabría decirte. El ADN es ADN. Deberían poder utilizarse perfectamente como de hecho se utilizan y también en los test de paternidad, identificación de personas, etc. Sin embargo, hoy en día para algunos casos se utilizan técnicas más sofisticadas que permiten aún mayor resolución como la electroforesis capilar. Podría hacer un vídeo sobre electroforesis capilar más adelante. 😉
@@nutrimente hola guapa! Gracias por tu respuesta ☺️ Ayer terminé con la GE y empecé con la CE. El ámbito forense es tan estricto, tiene unos requisitos tan altos q si q encuentran grandes limitaciones en la GE: menores voltajes, menor resolución, automatización, visionado a t real en la CE, la CE permite trabajar con menores cantidades de muestra…. En fin, los estándares en forense son especiales. Me estoy preparando unas oposiciones hiper mega difíciles y es difícil hasta buscar la info para forense, porque todo cambia con respecto al ámbito clínico 🤷🏻♀️ Q pases un buen día!
Tengo una duda , si me podrias explicar por favor. Si la banda de mi muestra sale como en el video de hoy, como contrastada, que significa. Que esta contaminada la muestra ? Es q en algunas muestras la mayoria d elas bandas me salen con una linea oscura pero hay alguna que sale con multiples lineas como contrastada e inclyso mi muestra de control pero no asi mi contro de agua y blanco. Que significa esto. Si sabrias el pprq sale esto. Muchas gracias
Un posible motivo de eso puede ser que estés teniendo amplificación inespecífica. Es decir, que tus primers se están uniendo a varios sitios del ADN además del deseado por vos, entonces se producen varios amplicones de distintos tamaños que vos luego ves como varias bandas. Cuando pasan estas cosas es todo prueba y error hasta dar con el motivo. Lo que podés hacer es probar con nuevos primers o con nuevas secuencias de primers.
No, quédate tranquilo. El transiluminador seguramente era de luz UV. Porque lo hayas visto conectado no vas a desarrollar cáncer. 😉 El contacto directo con el bromuro puede ser peligroso pero si no lo tocaste no pasa nada.
@@nutrimente había unos desechos en una nevera pero eran puros papeles dentro de un bolsa de cierre, lo toqué con guantes cuando hacía inventario pero si me asusté cuando me enteré que era desechos de bromuro pero lavé los guantes de nitrilo porque pensé que era otra cosa y seguí haciendo inventario y de ahí bote los guantes, aunque me dijeron que si no toco el líquido sin protección no pasa nada osea solo toqué la funda de cierre unos segundos para leer que nombre tenía nada más. Pero ya con esto me mantiene tranquilo.
Estaba haciendo inventario y habia unos desechos de geles, era nuevo no sabia que era eso, eran papeles en una bolsa plástica de cierre en congelador de -20 grados y usé guantes de nitrilo, lavé los guantes con mucho jabón y alcohol, me dicen que mientras no haya contacto con mi piel el gel o el líquido en si no pasaba nada, pero de todos modos me preocupa no tenia el nombre de eso, solo decia material para descartar peligroso pero no lo abrí ni nada solo lo toqué para ver la descripción que tenía en la bolsa, estoy asustado por eso a pesar que no toqué ningun gel o líquido solo lo de afuera de la bolsa.
Quédate tranquilo. No pasa nada. Es la manera correcta de descartar los geles en bolsa. Si tocaste la bolsa y no los geles, y además tenías guantes no corrés ningún riesgo.
@@nutrimente Gracias ya estoy tranquilo, además tomé agua después con los guantes lavado, ese fue mi error de novato pero me estoy tranquilo porque solo toqué la bolsa por unos segundos y ahí lavar y luego deseché los guantes porque aún estaba en el inventario. Gracias por la información.
Para las proteínas en general se usa un desnaturalizante (SDS) que además de desnaturalizarlas, les brinda una carga negativa y uniforme a todas las proteínas. Entonces su movimiento en el gel ya no depende de su carga ni de su estructura tridimensional (que puede ser muy variable), sino que únicamente de su masa. Podes ver un poco más de esto en el vídeo de western blot del canal, donde vemos la electroforesis de proteínas en gel de poliacrilamida 😉
Hola! una vez que tengo el peso de la muestra de ADN, ¿Cómo hago para saber si esa muestra corresponde a una determinada bacteria, por ejemplo? Desde ya, muchas gracias
Depende el caso. De dónde salió tu muestra de ADN? Si es una muestra de ADN extraído de una superficie, por ejemplo, y querés saber si ahí estaba presente una determinada bacteria, lo que tenés que hacer, antes de hacer la electroforesis, es una PCR con primers específicos para una secuencia de esa bacteria determinada. Entonces, cuando hagas la electroforesis de lo que obtuviste de la PCR, vas a poder saber si la bacteria estaba o no en la muestra original de acuerdo a si obtenés o no una banda en el peso esperado.
Hola! Perdón me quedaron colgados los mensajes!! Espero que te sirva igual la respuesta. En general las bacterias conocidas ya tienen su genoma secuenciado y se puede encontrar en bases de datos. Conociendo una secuencia específica de esa bacteria que querés detectar se pueden diseñar los primers. Hay programas que ayudan con eso o se puede diseñar a mano digamos, sabiendo algunas condiciones que deben cumplir que menciono un poco en el video de PCR. Cuando tenés las secuencias de los primers que querés se mandan a sintetizar. Hay empresas que se dedican a eso. Como vos diseñaste los primers vas a saber el tamaño del amplicón que se obtiene de la PCR entonces en la electroforesis vas a poder distinguir tu banda específica de acuerdo a su peso molecular. 😉
Hola!! Dependiendo el experimento de deben hacer diferentes controles para corroborar que los resultados que obtenemos son confiables y no hubo algún error en el proceso. En general se hace un control + en la corrida, en donde se corre un calle con una muestra de ADN de tamaño conocido. Que esa muestra resulte de acuerdo a lo esperado nos indica que la corrida se realizó correctamente, por ejemplo. También se suele correr un control -, donde se suele sembrar una calle con una muestra que sabemos que no debería contener ADN (por ejemplo, si venimos de una PCR, una muestra en donde de hizo todo el proceso pero no se agregó ADN templado). Que no de nada en esa calle nos indica que los reactivos no estaban contaminados con otro ADN que no es de nuestro interés. Estos controles son importantes para detectar posibles errores técnicos que podrían hacernos llegar a conclusiones erróneas.
Me encantan estos videos. Te dan mucha información, detalles y pormenores que te permiten comprender mejor lo que uno estudia. Gracias y seguí así.
Muchas gracias!!! 😊❤️
Solo un comentario, el polo negativo se llama ánodo, y el positivo cátodo.
Depende
Antes tenía esa idea erronea, pero no, no es así
El polo positivo se llama ánodo porque atrae aniones (carga negativa). Y viceversa contrario para el cátodo
Hola una duda, ¿Qué procede si las bandas quedan en medio de dos bandas de indicador? ¿Cómo interpreto eso?
El indicador o marker lo que te da es una referencia de bandas con tamaños de moléculas conocidas. Si tu banda se encuentra entre dos bandas del indicador te dice que tu molécula de ADN tiene un tamaño intermedio entre esas dos bandas del indicador cuyo tamaño conoces. Si ya sabés el tamaño de tu molécula de interés, eso te va a permitir una identificación (al menos estimada)
Muy buen video! Se agradece mucho este tipo de contenido en youtube
🥰🥰 gracias!!!
me ecanto explica de manera muy clara el proceso 10/10
Muchas gracias 😊
Gran video y excelente explicación! Solo tengo una duda, si experimentalmente coloco una muestra de ADN y ARN juntos en una electroforesis, qué puede pasar con el ARN? Se puede diferenciar del ADN en el gel? Saludos y gracias por el video!!
Hola! Muchas gracias! 😊
La técnica como la expliqué en el video sirve específicamente para estudiar moléculas de ADN, ya que el bromuro de etidio que se usa para visualizar las bandas en el gel se une a ácidos nucleicos de doble cadena (ADN, y no ARN). Para estudiar el ARN hay dos formas. Una directa y otra indirecta.
La directa sería tomando el ARN directamente de una muestra, correrlo por electroforesis en un gel y luego transferirlo a una membrana de nitrocelulosa por ejemplo, que se trata con una sonda de ADN marcado que se va a aparear específicamente con el fragmento de ARN que se quiera estudiar, para poder visualizarlo. Esta técnica se llama Northern blot (similar a lo que se hace en el Western blot con las proteínas que explico en otro video de esta serie).
La otra forma indirecta es tomar el ARN de la muestra y hacer una RT-PCR (PCR con transcripción reversa, que explico en otros videos de esta serie), para pasar del ARN a ADNc y amplificarlo. De esa manera sí se podría visualizar de la manera que vemos en este video simplemente con la electroforesis sin hacer un bloting posterior.
La elección del método dependerá de las posibilidades del lab y de lo que se desee estudiar.
Espero haber sido clara! 😉
@@nutrimente Siii fuiste clarísima, mil gracias por responder y rápidamente!! Ahora a terminar mi Tp, gracias nuevamente!!
Luego de identificar y separar los fragmentos de interés, ¿Cómo se pueden observar?.
Es decir, si quiero ver la secuencia al detalle, que tecnicas o equipos se usan?
Lo que podés observar con el método explicado en este video es únicamente las bandas que te informan la presencia o ausencia de un fragmento en cuestión. Si lo que querés conocer es la secuencia en detalle de ese fragmento tenés que hacer posteriormente una secuenciación. En esta misma serie del canal encontrás un vídeo sobre secuenciación explicando la técnica 😉 ua-cam.com/video/l56oBvwbzv0/v-deo.htmlsi=0NX4Lk3nMJfXNIXu
Me encantan estos videos. Te dan mucha información, detalles y pormenores que te permiten comprender mejor lo que uno estudia. Gracias y seguí así.
Muchas gracias!!! 😊❤️❤️🫂
Perdona q te moleste, tengo una pregunta… la única diferencia entre gel de agarosa y poliacrilamida esta en el tamaño de poro q se consigue? Permitiendo distinta movilidad de distintos tamaños?
Y por otra parte, cuáles serían las limitaciones de la electroforesis en gel en el ámbito forense?
Si te va bien contestarme te lo agradezco, si no no te preocupes ☺️ no pasa nada.
Muchas gracias!
Hola!! Si, básicamente con un gel de poliacrilamida podés lograr una resolución mucho mayor que con la agarosa si necesitas ver diferencias de pocas bases, pero es más engorroso y caro de hacer. Vemos un poco del gel de poliacrilamida en el vídeo de Western blot.
Respecto a las limitaciones de estás técnicas electroforéticas en el ámbito forense... No sabría decirte. El ADN es ADN. Deberían poder utilizarse perfectamente como de hecho se utilizan y también en los test de paternidad, identificación de personas, etc. Sin embargo, hoy en día para algunos casos se utilizan técnicas más sofisticadas que permiten aún mayor resolución como la electroforesis capilar. Podría hacer un vídeo sobre electroforesis capilar más adelante.
😉
@@nutrimente hola guapa! Gracias por tu respuesta ☺️
Ayer terminé con la GE y empecé con la CE. El ámbito forense es tan estricto, tiene unos requisitos tan altos q si q encuentran grandes limitaciones en la GE: menores voltajes, menor resolución, automatización, visionado a t real en la CE, la CE permite trabajar con menores cantidades de muestra…. En fin, los estándares en forense son especiales.
Me estoy preparando unas oposiciones hiper mega difíciles y es difícil hasta buscar la info para forense, porque todo cambia con respecto al ámbito clínico 🤷🏻♀️
Q pases un buen día!
Tengo una duda , si me podrias explicar por favor. Si la banda de mi muestra sale como en el video de hoy, como contrastada, que significa. Que esta contaminada la muestra ? Es q en algunas muestras la mayoria d elas bandas me salen con una linea oscura pero hay alguna que sale con multiples lineas como contrastada e inclyso mi muestra de control pero no asi mi contro de agua y blanco. Que significa esto. Si sabrias el pprq sale esto. Muchas gracias
Un posible motivo de eso puede ser que estés teniendo amplificación inespecífica. Es decir, que tus primers se están uniendo a varios sitios del ADN además del deseado por vos, entonces se producen varios amplicones de distintos tamaños que vos luego ves como varias bandas. Cuando pasan estas cosas es todo prueba y error hasta dar con el motivo. Lo que podés hacer es probar con nuevos primers o con nuevas secuencias de primers.
Si por accidente me meto por un segundo a esa área y no manipulo ese bromuro, pero está encendido, hay riesgo aún?
No entiendo la pregunta. Decís que no lo tocaste pero viste las bandas encendidas? Riesgo de qué?
@@nutrimente no ví encendido solo conectado el aparato y no toqué el bromuro, habrá riesgo de contraer cáncer?
Era un transiluminador en forma de pirámide de color negro.
No, quédate tranquilo. El transiluminador seguramente era de luz UV. Porque lo hayas visto conectado no vas a desarrollar cáncer. 😉 El contacto directo con el bromuro puede ser peligroso pero si no lo tocaste no pasa nada.
@@nutrimente había unos desechos en una nevera pero eran puros papeles dentro de un bolsa de cierre, lo toqué con guantes cuando hacía inventario pero si me asusté cuando me enteré que era desechos de bromuro pero lavé los guantes de nitrilo porque pensé que era otra cosa y seguí haciendo inventario y de ahí bote los guantes, aunque me dijeron que si no toco el líquido sin protección no pasa nada osea solo toqué la funda de cierre unos segundos para leer que nombre tenía nada más. Pero ya con esto me mantiene tranquilo.
una pregunta, como se sabe si hay adn fragmentado en la visualización del gel de agarosa?
Dependiendo la cantidad que haya se puede ver como una chorreado en la calle del gel.
Estaba haciendo inventario y habia unos desechos de geles, era nuevo no sabia que era eso, eran papeles en una bolsa plástica de cierre en congelador de -20 grados y usé guantes de nitrilo, lavé los guantes con mucho jabón y alcohol, me dicen que mientras no haya contacto con mi piel el gel o el líquido en si no pasaba nada, pero de todos modos me preocupa no tenia el nombre de eso, solo decia material para descartar peligroso pero no lo abrí ni nada solo lo toqué para ver la descripción que tenía en la bolsa, estoy asustado por eso a pesar que no toqué ningun gel o líquido solo lo de afuera de la bolsa.
Quédate tranquilo. No pasa nada. Es la manera correcta de descartar los geles en bolsa. Si tocaste la bolsa y no los geles, y además tenías guantes no corrés ningún riesgo.
@@nutrimente Gracias ya estoy tranquilo, además tomé agua después con los guantes lavado, ese fue mi error de novato pero me estoy tranquilo porque solo toqué la bolsa por unos segundos y ahí lavar y luego deseché los guantes porque aún estaba en el inventario. Gracias por la información.
¿Si las proteínas son positivas, se deben de poner en la parte postiza para que se mueva hacia la negativa?
Para las proteínas en general se usa un desnaturalizante (SDS) que además de desnaturalizarlas, les brinda una carga negativa y uniforme a todas las proteínas. Entonces su movimiento en el gel ya no depende de su carga ni de su estructura tridimensional (que puede ser muy variable), sino que únicamente de su masa. Podes ver un poco más de esto en el vídeo de western blot del canal, donde vemos la electroforesis de proteínas en gel de poliacrilamida 😉
Genial, genial, genial. Gracias!
❤️❤️☺️
Hola! una vez que tengo el peso de la muestra de ADN, ¿Cómo hago para saber si esa muestra corresponde a una determinada bacteria, por ejemplo? Desde ya, muchas gracias
Depende el caso. De dónde salió tu muestra de ADN? Si es una muestra de ADN extraído de una superficie, por ejemplo, y querés saber si ahí estaba presente una determinada bacteria, lo que tenés que hacer, antes de hacer la electroforesis, es una PCR con primers específicos para una secuencia de esa bacteria determinada. Entonces, cuando hagas la electroforesis de lo que obtuviste de la PCR, vas a poder saber si la bacteria estaba o no en la muestra original de acuerdo a si obtenés o no una banda en el peso esperado.
El vídeo anterior a este en esta serie es sobre PCR 😉
@@nutrimente genial, y los primers específicos cómo los obtengo? se compran?
El peso esperado (por ej de un fragmento de ADN de una bacteria), con el cual yo voy a comparar mi muestra, ¿de dónde se obtiene?
Hola! Perdón me quedaron colgados los mensajes!! Espero que te sirva igual la respuesta. En general las bacterias conocidas ya tienen su genoma secuenciado y se puede encontrar en bases de datos. Conociendo una secuencia específica de esa bacteria que querés detectar se pueden diseñar los primers. Hay programas que ayudan con eso o se puede diseñar a mano digamos, sabiendo algunas condiciones que deben cumplir que menciono un poco en el video de PCR. Cuando tenés las secuencias de los primers que querés se mandan a sintetizar. Hay empresas que se dedican a eso. Como vos diseñaste los primers vas a saber el tamaño del amplicón que se obtiene de la PCR entonces en la electroforesis vas a poder distinguir tu banda específica de acuerdo a su peso molecular. 😉
gran explicación gracias
☺️♥️
Excelente explicación!
Muchas gracias!! ☺️
Muchas graciaaas
🥰
Gracias ☺️
😊❤️
Hola, una pregunta. Como seria eso del control+ y control- ? Como puedo identificar un falso negativo? Desde ya muchas gracias
Hola!! Dependiendo el experimento de deben hacer diferentes controles para corroborar que los resultados que obtenemos son confiables y no hubo algún error en el proceso. En general se hace un control + en la corrida, en donde se corre un calle con una muestra de ADN de tamaño conocido. Que esa muestra resulte de acuerdo a lo esperado nos indica que la corrida se realizó correctamente, por ejemplo. También se suele correr un control -, donde se suele sembrar una calle con una muestra que sabemos que no debería contener ADN (por ejemplo, si venimos de una PCR, una muestra en donde de hizo todo el proceso pero no se agregó ADN templado). Que no de nada en esa calle nos indica que los reactivos no estaban contaminados con otro ADN que no es de nuestro interés. Estos controles son importantes para detectar posibles errores técnicos que podrían hacernos llegar a conclusiones erróneas.
@@nutrimente Muchas gracias