Como fazer uma curva padrão de respeito!
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- Опубліковано 31 жов 2024
- A análise de expressão gênica e outros tipos de quantificação relativa por PCR em tempo real, podem ser realizadas por meio de curvas padrão.
Este método de quantificação, no entanto, pode guardar alguns segredinhos e ser um pouco confuso.
Neste vídeo eu te ensino tudo o que você precisa saber para fazer uma curva padrão adequada. Além disso, também te dou alguma dicas que podem ser muito úteis na sua rotina do laboratório.
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Tudo que eu precisava. Obrigada, Eduardo ☺️ aula maravilhosa!
Muita perfeição em uma aula só, obrigada. 👏👏🙌
Muito obrigado pela aula!!! Parabéns pelo trabalho
Eu que agradeço
Muito bom! Obrigada.
Fiz a qPCR apenas das minhas diluições, mas todas ficaram com cts entre 34 e 37. Já repeti e sempre dá o mesmo resultado.
Caso tiver um ponto fora da curva, posso diluir a amostra?
Oi, Eduardo. Tudo bem? Muito bom o vídeo. Um ponto de atenção: - O valor, em nanogramas da amostra "teste" no minuto 27 do seu vídeo seria 31,6 ng e não 50ng como dito. Na escala logaritmica, como demonstrado (1000 (3) -> 100 (2) -> 10 (1) > 1 (0)), a metade exata é 3,16 vezes o valor anterior. Ou seja, o valor de 1,5 (valor entre 10 e 100) é 31,6. Você também pode usar o calculo de log basico para chegar nessa conclusão: log1,5 na base 10 = x -> 10^x = 1,5 => 10^x = 10^1 x 10^0,5 = 10 x 3,16 = 31,6. Portanto a resposta da quantidade de massa presente seria de 31,6 ng.
Preciso saber como definir o limite de Detecção e precisão de um teste?
Pra eu iniciar a diluição da minha curva padrão, preciso conhecer a quantidade de microorganismos por ul não preciso?
Eu fiz a contagem da minha hemocultura pra iniciar minhas diluições. Está correto?
Está correto. Mas a curva padrão da aula é para quantificação relativa. No seu caso, acredito que tenha sido uma quantificação absoluta.
Ah, certo! Não tinha certeza se tinha entendido bem a diferença entre absoluta e relativa.