Відео

En el ejemplo del video el suero contendría anticuerpos de tipo IgG humanos (que son los que se unen al antígeno viral), y el conjugado estaría formado por un anticuerpo obtenido de un animal al que se ha unido una enzima y reconoce IgG humana. El animal habrá sido inmunizado con anticuerpos IgG humano (que son antígeno para el animal) y habrá generado anticuerpos que reconocen como extraño a los anticuerpos humanos. Esos anticuerpos de origen animal reconocerán epitopos presentes en la IgG humana. Y esa especificidad es la que se aprovecha para poder hacer el experimento de la forma indicada en el video. Esos anticuerpos de origen animal que forman parte del conjugado podemos describirlos como anticuerpos anti-anticuerpos humanos. Pueden ser anticuerpos monoclonales o haber sido purificados a partir del suero del animal mediante algún sistema de que permita la selección solamente de los anticuerpos del suero que reconozcan a los anticuerpos humanos (por ejemplo, cromatografía de afinidad o similar).

@@josebabikandi2454 hola, gracias por tu explicación, sin embargo, lo que no entiendo es porque se refiere a "epitopo" del Ac y no "paratope"?

@@ceciliamarinzambrano1067 El video dice literalmente que "el conjugado debe ser específico de algún epitopo presente en el tipo de inmunoglobulina que se busca en el suero". El anticuerpo del conjugado (de origen no-humano) debe reconocer al anticuerpo humano que se ha unido previamente al antígeno vírico durante la primera incubación. El anticuerpo del conjugado (y más concretamente el paratopo de ese anticuerpo) reconoce el anticuerpo humano (obviamente, reconoce un epitopo del anticuerpo humano).

ugh.

el elisa directo reconoce antigenos y el indirecto anticuerpos. Creo que la partde fundamental no lo explico, y es que cuando agregas el antigeno a medir en el pocillo, anteriormente tenes que tener tu anticuerpo anti el antigeno a medir. Es decir, en este caso tenia en su posillo anticuerpos Anti HBsag, por eso es que se unen. En el elisa indirecto es al reves, en el posillo vos tenes el antigeno a medir, y usas el suero del paciente para ver si tiene anticuerpos ante ese antigeno, y despues usas un anticuerpo anti anticuerpo conjugado con la enzima para ver si hubo interaccion Ag-Ac

No, es otro tipo ;)

Lo que describeses lo que se muestra en el video. Probablemente has visto el video de ELISA directo y el comentario lo haces en este otro video.

Si, pero pero cada tipo de ELISA mide una cosa diferente, y habrá que tenerlo en cuenta. ¿Cuándo tenemos un valor de absorbancia positivo en la ELISA? - Con los valores de absorbancia de los controles negativos se calcula la media y la desviación estándar (SD). - Se determina un valor de corte (Cut off) que, habitualmente, es igual a [media + 3 x SD]. - Los valores de absorbancia superiores al valor cutoff,se considerarán positivos. Nota: Se usa 3 veces la desviación estándar para asegurarnos con una probabilidad del 99.7 % que cualquier valor de absorbancia superior al cut off es un positivo en ELISA (para entenderlo, revisar la distribución normal o campana de Gaus y los que significa la desviación estándar). Sobre los tipos de resultados: Cualitativos: el resultado es positivo (el valor de la absorbancia es mayor que el cut off) o negativo (es menor al cut of) Semicuantitativa: se hace diluciones del suero y se determina cuál es la dilución más alta que es positiva. Esa dilución corresponde al “título”, que es una media semicuantitativa (no tiene unidades). En la bibliografía se suele expresar de dos formas diferentes en función del libro. Si la última dilución más alta que nos ha dado un valor positivo es la dilución 1/16, en algunos sitios nos dirán que el título de anticuerpos es de 1/16, y en otros que es 16 (el inverso de la dilución). Cuantitativa: necesitamos añadir a la placa de ELISA una serie de diluciones en los que podamos relacionar valores de absorbancia con , por ejemplo, concentraciones crecientes de anticuerpos (se conocerán cuantos microgramos de anticuerpos hay en cada pocillo de la placa). De esa forma podremos obtener una recta de regresión entre la absorbancia y la concentración de anticuerpos. Una vez tengamos la recta (y=ax+b), el valor de absorbancia de nuestra muestra problema la podremos relacionar con lo la concentración de anticuerpos.

@@rosariosanmillan7865 muchas gracias por resolverme la duda. Con que cada ELISA mide algo diferente imagino que te refieres a que por ejemplo con un tipo podrías detectar antígenos como marcadores tumorales..y con otro tipo de ELISA por ejemplo Anticuerpos HIV...refiriéndome a que cada uno tiene una aplicación, y que con unos puedes buscar Ag y con otro Ac... Estoy preparando oposiciones y nunca he usado esta técnica, por lo que te agradezco también la información de cómo tomar los valores de absorbancia como positivos. Muchas gracias por todos los vídeos y por resolver las dudas :). Un saludo.

​@@raquelmontenegro3066 Efectivamente, cada tipo de ELISA tiene una utilidad diferente.

En la ELISA Directa, los antigenos de la placa deben ser los que reconocerean los anticuerpos que queremos detectar. En el ejemplo corresponden a los del virus.

Gracias crack

La definición de epitopo (o determinante antigénico) que parece darse en el punto 4 no es correcta. Un epitopo no tiene porque ser algo conservado ("constante"). En este caso, el conjugado si debe unirse a un epitopo que esté presente en, por ejemplo, todas las IgG de todos los pacientes que se pudieran estudiar (estaría en todos los humanos). Ese alto nivel de conservación interindividuos del epitopo es obligatorio para que funcione el modelo de ELISA propuesto para la diagnosis de la hepatitis B. Pero eso no implica en absoluto que los epitopos que reconocen los anticuerpos sean conservados.

Lo lo

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